詳細(xì)介紹MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的操作步驟
更新時(shí)間：2023-02-13 點(diǎn)擊次數(shù)：1533次
MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒被廣泛應(yīng)用于由誘導(dǎo)劑和抑制劑引起的細(xì)胞增殖活性變化的體外檢測(cè)，也可以用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、藥物篩選、細(xì)胞毒性測(cè)定等。
MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒含有足夠的試劑用于評(píng)估在96孔板中進(jìn)行960次測(cè)定或在24孔板中進(jìn)行192次測(cè)定。細(xì)胞可以被鍍，然后用影響增殖的化合物或藥劑。然后用增殖試劑檢測(cè)細(xì)胞，在活細(xì)胞中由黃色四唑MTT轉(zhuǎn)化為紫色福爾馬贊形式細(xì)胞還原酶。
MTT細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的操作步驟：
1、制備含有0.1-1.0x106的細(xì)胞懸液培養(yǎng)基中的細(xì)胞/ml。
2、將每孔100μL加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或每孔500μL加入24孔細(xì)胞培養(yǎng)物中有或沒有待測(cè)化合物的板。細(xì)胞在37°C和5%培養(yǎng)24-96小時(shí)加濕培養(yǎng)箱中的二氧化碳。
3、加入10μlCytoSelect™MTT細(xì)胞增殖測(cè)定試劑，如果使用96-孔板，或24孔板的每個(gè)孔50µL。
4、在37°C和5%CO2下孵育平板3-4小時(shí)，直至可見紫色沉淀(細(xì)胞在光學(xué)顯微鏡下可以更精確地觀察到沉淀物)。
5、在96孔板的每孔中加入100μL去污劑溶液，或在24孔板的每孔中加入500μL去污劑溶液盤子。
6、在室溫下孵育2小時(shí)至避光過夜。
注意：在井中與洗滌劑溶液長(zhǎng)時(shí)間孵育可能導(dǎo)致沉淀或渾濁可以增加背景。如果觀察到沉淀，將板在37℃加熱10-20分鐘并攪拌溶解沉淀物。
7、使用540-570nm作為主波長(zhǎng)讀取吸光度。
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