SA-β-gal的檢測方法，你了解多少？
更新時間：2021-09-16 點擊次數：14994次
生衰退的變化過程。細胞衰老時，衰老相關半乳糖苷酶(
SA-β-gal)的活性會顯著增加，故常常檢測衰老相關半乳糖苷酶的活性以區分正常細胞與衰老細胞。目前，不同條件或化合物作用細胞后，常常用衰老相關半乳糖苷酶檢測作為細胞衰老的標志之一。
SA-β-gal檢測方法主要分為細胞化學染色法和熒光法。
一、細胞化學染色法：SA-βgal在pH6.0時，可將5-溴-4-氯-3-吲哚基β-D-吡喃半乳糖苷水解，產生不溶于水的藍色物質。這種藍色產物相當穩定，固定干燥后避光可保存幾個月。通過計算總群體中藍色細胞的數量，可以很容易地確定SA-β-半乳糖苷酶陽性的細胞比例，即衰老細胞的比例。但是需要注意的是，在所有細胞中普遍存在酸性半乳糖苷酶，在pH4.0時發揮作用。其實SA-βgal發揮作用的最適pH為4.5，但是在pH4.5時，酸性半乳糖苷酶也會水解底物，因此需要使用SA-βgal次適pH6.0，才能確保藍色產物是由于SA-βgal的作用而產生的。通常我們使用pH為6.0的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。
二、熒光法：熒光法需要借助另一種底物——C12FDG，不具有熒光，能透過細胞膜，但被βgal水解后可產生綠色熒光產物。利用流式細胞儀可檢測綠色熒光的產生，藉此反映βgal的表達。因此要想檢測SA-βgal的活性，需要先將溶酶體堿化至pH6.0。這一過程可使用氯喹或巴弗洛霉素A1等，可降低溶酶體的酸度，使溶酶體堿化至pH6.0。然后向細胞中加入C12FDG，孵育后制成可供流式分析細胞懸液，即可利用FC500MPL流式細胞儀等檢測SA-βgal的表達。
SA-β-gal細胞化學染色法通常需要半小時染色，數小時甚至一天時間等待染色完成以觀察和計數，而熒光法需要4至8小時處理細胞，1天內可完成計數。前者不僅可用于細胞培養液還可用以組織切片的染色，而且所需試劑和設備簡單，而后者更為高效，靈敏，定量更為準確。因此，根據實驗的不同目的可選擇不同的檢測方法。
咨詢電話